Daawada anthelmintic N,N-diethyl-m-toluamide (oo loo isticmaalo in lagu daaweeyo neefta iyo cunista)DEET) ayaa la sheegay inuu joojiyo AChE (acetylcholinesterase) wuxuuna leeyahay sifooyin kansar oo suurtagal ah sababtoo ah dhiig-baxa xad-dhaafka ah. Warqaddan, waxaan ku tusinaynaa in DEET si gaar ah u kiciso unugyada endothelial-ka kuwaas oo kor u qaada angiogenesis, taasoo kordhinaysa koritaanka burooyinka. DEET waxay kicisaa hababka unugyada taasoo horseedaysa angiogenesis, oo ay ku jiraan faafitaanka, socdaalka, iyo isku-xidhka. Tani waxay la xiriirtaa kororka wax soo saarka NO iyo muujinta VEGF ee unugyada endothelial-ka. Aamusnaanta M3 ama isticmaalka daawooyinka M3 waxay baabi'isay dhammaan saameyntan, taasoo soo jeedinaysa in angiogenesis-ka uu keeno DEET uu yahay mid xasaasi u ah M3. Tijaabooyinka ku lug leh calaamadaynta kaalshiyamka ee unugyada endothelial-ka iyo HEK ee si xad dhaaf ah u muujiya soo-dhoweeyayaasha M3, iyo sidoo kale daraasadaha isku xidhka iyo xidhitaanka, waxay muujinayaan in DEET ay u dhaqanto sidii modulator allosteric ah oo ka mid ah soo-dhoweeyayaasha M3. Intaa waxaa dheer, DEET waxay joojisaa AChE, taasoo kordhinaysa helitaanka acetylcholine iyo ku xidhnaanteeda soo-dhoweeyayaasha M3, iyo kor u qaadista saameynta proangiogenic iyada oo loo marayo nidaaminta allosteric.
EC-yada aasaasiga ah waxaa laga soocay halbowlaha jiirarka Swiss. Habka soo saarista waxaa laga soo qaatay hab-maamuuska Kobayashi 26. EC-yada Murine waxaa lagu beeray meel dhexdhexaad ah oo EBM-2 ah oo lagu kabay 5% FBS oo aan firfircoonayn kulaylka ilaa marinka afraad.
Saamaynta laba fiirsasho oo DEET ah ay ku leedahay faafitaanka HUVEC, U87MG, ama BF16F10 ayaa lagu falanqeeyay iyadoo la adeegsanayo Qalabka Baaritaanka Kororka Unugyada ee CyQUANT (Molecular Probes, C7026). Si kooban, 5.103 unug ayaa lagu beeray saxan 96-ceel ah, oo loo oggolaaday in lagu dhejiyo habeenkii, ka dibna lagu daaweeyay DEET muddo 24 saacadood ah. Ka dib marka laga saaro habka koritaanka, ku dar xalka isku xidhka rinjiga ceel kasta oo ka mid ah saxanka microplate-ka oo ku dhex geli unugyada heerkul ah 37 °C muddo 30 daqiiqo ah. Heerarka fluorescence-ka waxaa lagu go'aamiyay iyadoo la isticmaalayo akhristaha microplate-ka ee Mithras LB940 multimode (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Jarmalka) oo lagu qalabeeyay shaandheeyayaasha kicinta 485 nm iyo shaandheeyayaasha sii deynta 530 nm.
HUVEC waxaa lagu beeray saxanno 96-god ah oo cufnaantoodu tahay 104 unug halkii ceel. Unugyada waxaa lagu daaweeyay DEET muddo 24 saacadood ah. Noolaha noolaanshaha unugyada waxaa lagu qiimeeyay iyadoo la adeegsanayo tijaabo midabaysan oo MTT ah (Sigma-Aldrich, M5655). Qiimaha cufnaanta indhaha waxaa laga helay akhristaha microplate-ka badan (Mithras LB940) oo leh mowjad 570 nm ah.
Saamaynta DEET waxaa lagu bartay iyadoo la adeegsanayo tijaabooyinka angiogenesis-ka ee in vitro. Daaweynta 10-8 M ama 10-5 M DEET waxay kordhisay sameynta dhererka xididka ee HUVECs (Sawirka 1a, b, baararka cad). Marka la barbardhigo kooxda xakamaynta, daaweynta xoogga DEET ee u dhaxaysa 10-14 ilaa 10-5 M waxay muujisay in dhererka xididku uu gaaray meel siman oo ah 10-8 M DEET (Sawirka Dheeraadka ah ee S2). Ma jirin farqi weyn oo laga helay saameynta proangiogenic-ka ee in vitro ee HUVECs ee lagu daaweeyay DEET ee heerka xoogga 10-8 M iyo 10-5 M.
Si loo ogaado saameynta DEET ku leedahay neovascularization, waxaan sameynay daraasado ku saabsan neovascularization in vivo. 14 maalmood ka dib, jiirarka lagu duray unugyada endothelial-ka ee lagu beeray 10-8 M ama 10-5 M DEET waxay muujiyeen koror weyn oo ku yimid heerka hemoglobin (Jaantuska 1c, baararka cad).
Intaa waxaa dheer, neovascularization-ka uu keeno DEET ayaa lagu bartay jiirarka xenograft-ka ee U87MG kuwaas oo lagu duray maalin kasta (ip) DEET qiyaas la og yahay inay kiciso heerarka plasma ee 10-5 M, taas oo caadi u ah dadka soo gaadhay. 23. Burooyinka la ogaan karo (tusaale ahaan burooyinka >100 mm3) ayaa la arkay 14 maalmood ka dib markii unugyada U87MG lagu duray jiirarka. Maalintii 28, koritaanka burooyinka ayaa si weyn u kordhay jiirarka lagu daweeyay DEET marka la barbar dhigo jiirarka la xakameeyo (Jaantuska 1d, afargeeslaha). Intaa waxaa dheer, rinjiyeynta CD31 ee burooyinka ayaa muujisay in DEET ay si weyn u kordhisay aagga xididdada dhiigga laakiin aysan ahayn cufnaanta microvessel. (Jaantuska 1e-g).
Si loo go'aamiyo doorka soo-dhoweeyayaasha muscarinic ee ku jira faafitaanka DETA, 10-8 M ama 10-5 M DETA iyadoo ay joogaan pFHHSiD (10-7 M, oo ah soo-dhoweeye M3 oo la xushay) ayaa la isticmaalay. Daaweynta HUVEC. pFHHSiD waxay si buuxda u xannibtay sifooyinka faafinta ee DETA dhammaan fiirsashada (Jadwalka 1).
Xaaladahan oo kale, waxaan sidoo kale baarnay in DEET ay kordhin doonto dhererka xididka ee unugyada HUVEC. Sidoo kale, pFHHSiD si weyn ayuu uga hortagay dhererka xididka ee uu keeno DEET (Sawirka 1a, b, baararka cawlan). Intaa waxaa dheer, tijaabooyin la mid ah ayaa lagu sameeyay M3 siRNA. Inkasta oo siRNA-ga xakamaynta uusan waxtar u lahayn kor u qaadista sameynta xididka, aamusinta soo-dhoweeyaha muscarinic M3 wuxuu meesha ka saaray awoodda DEET ee kordhinta dhererka xididka (Sawirka 1a, b, baararka madow).
Intaa waxaa dheer, dhiig-baxa 10-8 M ama 10-5 M ee DEET uu keeno in vitro iyo neovascularization in vivo labadaba waxaa gebi ahaanba xannibay pFHHSiD (Sawirka 1c, d, wareegyada). Natiijooyinkani waxay muujinayaan in DEET ay kor u qaaddo angiogenesis iyada oo loo marayo waddo xasaasi u ah antagonist-ka soo-dhoweynta M3 ee la xushay ama M3 siRNA.
AChE waa bartilmaameedka molecular-ka ee DEET. Daawooyinka sida donepezil, kuwaas oo u shaqeeya sida kuwa joojiya AChE, waxay kicin karaan angiogenesis EC in vitro iyo moodeellada ischemia ee dhabarka dambe ee jiirka14. Waxaan tijaabinay saameynta laba fiirsasho oo DEET ah oo ku saabsan dhaqdhaqaaqa ensaymka AChE ee HUVEC. Fiirsashada hoose (10-8 M) iyo sare (10-5 M) ee DEET waxay hoos u dhigtay dhaqdhaqaaqa AChE ee endothelial marka la barbar dhigo xaaladaha xakamaynta (Jaantuska 2).
Labada fiirsasho ee DEET (10-8 M iyo 10-5 M) waxay yareeyeen dhaqdhaqaaqa acetylcholinesterase ee HUVEC. BW284c51 (10-5 M) waxaa loo isticmaalay sidii xakameyn loogu talagalay inhibitors acetylcholinesterase. Natiijooyinka waxaa lagu muujiyay boqolkiiba dhaqdhaqaaqa AChE ee HUVEC oo lagu daweeyay labada fiirsasho ee DEET marka la barbar dhigo unugyada lagu daweeyay gaariga. Qiimayaasha waxaa lagu muujiyay celcelis ahaan ± SEM lix tijaabo oo madax-bannaan. *p < 0.05 marka la barbar dhigo xakamaynta (tijaabada isbarbardhigga badan ee Kruskal-Wallis iyo Dunn).
Nitric oxide (NO) waxay ku lug leedahay habka angiogenic 33, sidaa darteed, wax soo saarka NO ee HUVEC-yada kiciyay DEET ayaa la darsay. Wax soo saarka NO ee endothelial-ka ee lagu daweeyay DEET ayaa la kordhiyay marka la barbar dhigo unugyada xakamaynta, laakiin waxay gaartay muhiimad kaliya qiyaasta 10-8 M (Jaantuska 3c). Si loo go'aamiyo isbeddellada molecular-ka ee xakameynaya wax soo saarka NO ee DEET ay keento, muujinta eNOS iyo dhaqdhaqaaqa waxaa lagu falanqeeyay Western blotting. Inkasta oo daaweynta DEET aysan beddelin muujinta eNOS, waxay si weyn u kordhisay fosforylation-ka eNOS goobteeda firfircoon (Ser-1177) iyadoo hoos u dhigaysa goobteeda xannibaadda (Thr-495) marka la barbar dhigo unugyada aan la daaweyn ee fosforylation-ka eNOS (Jaantuska 3d). Intaa waxaa dheer, saamiga eNOS ee fosforylated-ka ee goobta kicinta iyo goobta xannibaadda ayaa la xisaabiyay ka dib markii la caadiyeeyay xaddiga eNOS ee fosforylated-ka ee wadarta guud ee ensaymka. Saamigani si weyn ayaa loogu kordhiyay HUVEC-yada lagu daweeyay fiirsashada kasta ee DEET marka la barbar dhigo unugyada aan la daweynin (Jaantuska 3d).
Ugu dambeyntii, muujinta VEGF, oo ah mid ka mid ah arrimaha ugu waaweyn ee keena caabuqa neerfaha, ayaa lagu falanqeeyay Western blotting. DEET waxay si weyn u kordhisay muujinta VEGF, halka pFHHSiD ay si buuxda u xannibtay muujintaas.
Maadaama saameynta DEET ay xasaasi u tahay xannibaadda daawada iyo hoos u dhigista soo-dhoweeyayaasha M3, waxaan tijaabinay mala-awaalka ah in DEET ay kor u qaadi karto calaamadda kalsiyum. Waxaa la yaab leh, DEET waxay ku guuldareysatay inay kordhiso kalsiyum cytoplasmic ah oo ku jira HUVEC (xogta aan la muujin) iyo HEK/M3 (Jaantuska 4a, b) labada fiirsasho ee la isticmaalay.
Waqtiga boostada: Diseembar-30-2024