Daawada anthelmintic N,N-diethyl-m-toluamide (DEET) ayaa lagu soo warramey in ay joojiso AChE (acetylcholinesterase) waxayna leedahay sifooyin kansar oo suurtagal ah sababtoo ah xididdada xad-dhaafka ah. Warqadan, waxaan ku tusineynaa in DEET ay si gaar ah u kiciso unugyada endothelial kuwaas oo kor u qaada angiogenesis, taas oo kordhinaysa koritaanka burooyinka. DEET waxay hawlgelisaa hababka gacanta ee keena angiogenesis, oo ay ku jiraan fidinta, guuritaanka, iyo adhesion. Tani waxay la xiriirtaa kororka wax soo saarka NO iyo muujinta VEGF ee unugyada endothelial. Aamusnaanta M3 ama isticmaalka dawooyinka dawooyinka ee M3 inhibitors ayaa baabi'isay dhammaan saameynahaas, iyagoo soo jeedinaya in angiogenesis-ka ay keentay DEET ay tahay M3-xasaasi. Tijaabooyinka ku lug leh calaamadaynta kaalshiyamka ee unugyada endothelial iyo HEK oo si xad dhaaf ah u saaraya soo-qabayaasha M3, iyo sidoo kale isku-xidhka iyo daraasadaha, waxay muujinayaan in DEET ay u shaqeyso sidii modulator-ka allosteric-ka ee M3. Intaa waxaa dheer, DEET waxay joojisaa AChE, taas oo kordhinaysa bioavailability ee acetylcholine iyo ku xirnaanta M3 reseptors, iyo kor u qaadida saamaynta proangiogenic iyada oo loo marayo nidaaminta allosteric.
EC-yada aasaasiga ah ayaa laga soocay halbowlaha jiirarka Swiss. Habka soo saarista waxa laga soo minguuriyay hab-maamuuska Kobayashi 26 . Murine ECs waxaa lagu dhaqay EBM-2 dhexdhexaad ah oo lagu kabay 5% kuleyl la'aan FBS ilaa marinka afraad.
Saamaynta laba uruurin ee DEET ee fidinta HUVEC, U87MG, ama BF16F10 ayaa lagu lafa guray iyadoo la isticmaalayo Qalabka CyQUANT Proliferation Assay Kit (Molecular Probes, C7026). Si kooban, 5.103 unug ceelkiiba ayaa lagu beeray saxan 96-ceel ah, oo loo oggolaaday in lagu xidho habeenkii, ka dibna lagu daweeyey DEET 24 saac. Ka dib markaad ka saarto dhexdhexaadinta korriinka, ku dar xalalka dheeha ee ceel kasta oo microplate ah oo ku dheji unugyada 37 ° C 30 min. Heerarka fluorescence waxaa lagu go'aamiyay iyadoo la adeegsanayo akhriyaha Mithras LB940 multimode microplate (Berthold Technologies, Bad Wildbad, Germany) oo ku qalabaysan 485 nm filtarrada kicinta iyo 530 nm filtarrada qiiqa.
HUVEC waxaa lagu beeray 96-ceel saxan oo cufnaanta ah 104 unug halkii ceel. Unugyada waxaa lagu daaweeyay DEET 24 saac. Jiritaanka unugga waxaa lagu qiimeeyay iyadoo la isticmaalayo midabaynta MTT ee midabka (Sigma-Aldrich, M5655). Qiimaha cufnaanta indhaha ayaa laga helay akhristaha qaab-dhismeedka qaab-dhismeedka badan (Mithras LB940) oo dhererkiisu yahay 570 nm.
Saamaynta DEET waxaa lagu bartay iyadoo la isticmaalayo in vitro angiogenesis assays. Daawaynta 10-8 M ama 10-5 M DEET waxay kordhisay samaynta dhererka xididada HUVECs (Jaantus. 1a, b, baararka cad). Marka la barbar dhigo kooxda kantaroolka, daawaynta xadiga DEET ee u dhaxaysa 10-14 ilaa 10-5 M waxay muujisay in dhererka xididku uu gaadhay meel sare oo ah 10-8 M DEET (Sawir Dheeraad ah S2). Ma jiro farqi weyn oo laga helay saamaynta proangiogenic ee vitro ee HUVECs ee lagu daweeyay DEET inta u dhaxaysa 10-8 M iyo 10-5 M.
Si loo go'aamiyo saameynta DEET ee neovascularization, waxaan ku sameynay daraasadaha neovascularization vivo. 14 maalmood ka dib, jiirarka lagu duray unugyada endothelial precultured leh 10-8 M ama 10-5 M DEET ayaa muujiyay koror weyn oo ku jira haemoglobin-ka (Jaantus. 1c, baararka cad).
Intaa waxaa dheer, neovascularization-ka ay keentay DEET ayaa lagu bartay U87MG xenograft-jiirarka kuwaas oo lagu duray maalin kasta (ip) DEET qiyaasta loo yaqaan inay kiciso uruurinta balaasmaha ee 10-5 M, taas oo caadi u ah bini'aadamka. gudaha 23. Burooyinka la ogaan karo (ie burooyinka> 100 mm3) ayaa la arkay 14 maalmood kadib duritaanka unugyada U87MG ee jiirarka. Maalintii 28, korriinka burooyinka ayaa si weyn kor loogu qaaday jiirka la daweeyay DEET marka la barbar dhigo jiirarka kantaroolka (Jaantus. 1d, labajibbaaran). Intaa waxaa dheer, CD31 midabaynta burooyinka waxay muujisay in DEET ay si weyn u korodhay aagga xididada laakiin maaha cufnaanta microvessel. (Sawirka 1e-g).
Si loo go'aamiyo doorka muscarinic reseptors ee faafinta DETA, 10-8 M ama 10-5 M DETA ee joogitaanka pFHHSiD (10-7 M, M3 antagonist antagonist) ayaa la isticmaalay. Daaweynta HUVEC. pFHHSiD waxay si buuxda u xannibtay sifooyinka fidinta ee DETA dhammaan xajmiyada (Shaxda 1).
Xaaladahan, waxaan sidoo kale baarnay in DEET ay kordhin doonto dhererka xididada unugyada HUVEC. Sidoo kale, pFHHSiD waxay si weyn uga hortagtay DEET dhererka xididada (Jaantus. 1a, b, baararka cawl). Intaa waxaa dheer, tijaabooyin la mid ah ayaa lagu sameeyay M3 siRNA. Inkasta oo siRNA kantaroolku aanu waxtar u lahayn kor u qaadida samaynta xididada, aamusnaanta M3 muscarinic reseptor ayaa baabi'isay awoodda DEET si ay u kordhiso dhererka xididka (Jaantus. 1a, b, baararka madow).
Intaa waxaa dheer, labadaba 10-8 M ama 10-5 M DEET-ku-soo-baxa vascularization in vitro iyo neovascularization in vivo ayaa si buuxda u xannibay pFHHSiD (Jaantus. 1c, d, goobo). Natiijooyinkani waxay muujinayaan in DEET ay kor u qaaddo angiogenesis iyada oo loo marayo dariiqa xasaasiga ah ee M3 antagonistayaasha soo dhaweynta ah ama M3 siRNA.
AChE waa bartilmaameedka molecular ee DEET. Daroogooyinka sida donepezil, oo u dhaqma sida AChE inhibitors, waxay kicin karaan EC angiogenesis in vitro iyo jiirka hindlimb ischemia model14. Waxaan tijaabinay saameynta laba uruurin ee DEET ee dhaqdhaqaaqa enzyme AChE ee HUVEC. Heerarka hoose ee (10-8 M) iyo sare (10-5 M) ee DEET waxay hoos u dhigtay dhaqdhaqaaqa endothelial AChE marka loo eego xaaladaha xakamaynta (Jaantus. 2).
Labada urur ee DEET (10-8 M iyo 10-5 M) waxay hoos u dhigeen dhaqdhaqaaqa acetylcholinesterase ee HUVEC. BW284c51 (10-5 M) ayaa loo isticmaalay xakamaynta acetylcholinesterase inhibitors. Natiijooyinka waxaa lagu muujiyay boqolkiiba inta dhaqdhaqaaqa AChE ee HUVEC lagu daweeyay labada urur ee DEET marka la barbar dhigo unugyada la daweeyay gaariga. Qiimaha waxaa lagu muujiyay celcelis ahaan ± SEM lix tijaabo oo madaxbannaan. *p <0.05 marka la barbar dhigo kantaroolka (Kruskal-Wallis iyo Dunn imtixaan isbarbardhig badan).
Nitric oxide (MAYA) waxay ku lug leedahay habka angiogenic 33, sidaas darteed, wax soo saarka DEET-kicin HUVECs lama darsay. DEET-la daweeyay endothelial NO wax soo saarka ayaa la kordhiyay marka la barbardhigo unugyada kantaroolka, laakiin waxay gaareen muhiimadda kaliya ee qiyaasta 10-8 M (Jaantus. 3c). Si loo go'aamiyo isbeddelada molecular ee xakameynaya wax soo saarka DEET-ku-abuuray NO, muujinta eNOS iyo firfircoonida ayaa lagu falanqeeyay burburinta reer galbeedka. Inkasta oo daawaynta DEET aysan bedelin muujinta eNOS, waxay si weyn u kordhisay eNOS fosforyaalka goobta firfircoonida (Ser-1177) iyada oo hoos u dhigaysa goobta xannibaadda (Thr-495) marka la barbardhigo unugyada aan la daweynin ee eNOS fosforyaalka (Jaantus 3d). Intaa waxaa dheer, saamiga eNOS fosforylated ee goobta firfircoonida iyo goobta xannibaadda ayaa la xisaabiyay ka dib markii la caadiyeeyay qaddarka fosfooraska eNOS ee wadarta qaddarka enzyme. Saamigan ayaa si weyn u kordhay HUVEC-yada lagu daweeyay urur kasta oo DEET ah marka loo eego unugyada aan la daawayn (Jaantus. 3d).
Ugu dambeyntii, muujinta VEGF, oo ah mid ka mid ah arrimaha ugu muhiimsan ee proangiogenic, ayaa lagu falanqeeyay nacaybka reer galbeedka. DEET waxay si weyn u kordhisay muujinta VEGF, halka pFHHSiD ay si buuxda u joojisay tibaaxan.
Maaddaama saamaynta DEET ay xasaasi u tahay xannibaadda dawooyinka iyo hoos u dhigista daaweeyayaasha M3, waxaanu tijaabinay mala-awaalka ah in DEET laga yaabo inay kor u qaaddo calaamadaha calcium. Waxaa la yaab leh, DEET waxay ku guuldareysatay inay kordhiso kaalshiyamka cytoplasmic ee HUVEC (xogta aan la muujin) iyo HEK/M3 (Jaantus. 4a, b) ee labadaba la isticmaalay.
Waqtiga boostada: Dec-30-2024