Daraasaddan, saameynta kicinta ee daaweynta isku dhafan eenidaamiyayaasha koritaanka dhirta(2,4-D iyo kinetin) iyo nanoparticles-ka birta oksaydhka (Fe₃O₄-NPs) ee ku jira morphogenesis-ka in vitro iyo wax soo saarka metabolite-ka labaad ee *Hypericum perforatum* L. ayaa la baaray. Daaweynta la hagaajiyay [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] waxay si weyn u wanaajisay xuduudaha koritaanka dhirta: dhererka geedka ayaa kordhay 59.6%, dhererka xididka 114.0%, tirada burooyinka 180.0%, iyo miisaanka cusub ee callus 198.3% marka la barbar dhigo kooxda xakamaynta. Daaweyntan isku dhafan ayaa sidoo kale xoojisay hufnaanta dib u soo kabashada (50.85%) waxayna kordhisay heerka hypericin 66.6%. Falanqaynta GC-MS waxay muujisay in ka kooban yihiin xaddi badan oo ah hyperoside, β-patholene, iyo alcohol cetyl, taasoo ka dhigan 93.36% wadarta guud ee aagga ugu sarreeya, halka ka kooban phenolics iyo flavonoids ay kordheen ilaa 80.1%. Natiijooyinkani waxay muujinayaan in nidaamiyayaasha koritaanka dhirta (PGRs) iyo nanoparticles-ka Fe₃O₄ (Fe₃O₄-NPs) ay sameeyaan saameyn isku-dhafan iyagoo kicinaya organogenesis iyo ururinta isku-dhafka noolaha firfircoon, taas oo u taagan istaraatiijiyad rajo leh oo loogu talagalay horumarinta bayotechnolojiyada dhirta daawada.
Wort-ka St. John (Hypericum perforatum L.), oo sidoo kale loo yaqaan St. John's wort, waa geed geedo ah oo waara oo ka tirsan qoyska Hypericaceae kaasoo leh qiimo dhaqaale.[1] Qaybaha bayoolojiga ee suurtagalka ah waxaa ka mid ah tannins dabiici ah, xanthones, phloroglucinol, naphthalenedianthrone (hyperin iyo pseudohyperin), flavonoids, asiidhyada phenolic, iyo saliidaha lagama maarmaanka ah.[2,3,4] Wort-ka St. John waxaa lagu faafin karaa habab dhaqameed; si kastaba ha ahaatee, xilliyada hababka dhaqameed, biqilka abuurka oo hooseeya, iyo u nuglaanshaha cudurrada ayaa xaddidaya awooddiisa beerista baaxadda weyn iyo sameynta joogtada ah ee metabolites-ka labaad.[1,5,6]
Sidaa darteed, dhaqanka unugyada in vitro waxaa loo arkaa hab wax ku ool ah oo loogu talagalay faafinta degdegga ah ee dhirta, ilaalinta kheyraadka jeermiska, iyo kordhinta wax soo saarka isku-dhafka daawada [7, 8]. Nidaamiyayaasha koritaanka dhirta (PGRs) waxay door muhiim ah ka ciyaaraan nidaaminta morphogenesis waxayna lagama maarmaan u yihiin beerista in vitro ee callus iyo noolaha oo dhan. Hagaajinta uruurintooda iyo isku-darka ayaa muhiim u ah dhammaystirka guusha leh ee hababkan horumarineed [9]. Sidaa darteed, fahamka isku-dhafka ku habboon iyo uruurinta nidaamiyeyaasha ayaa muhiim u ah hagaajinta koritaanka iyo awoodda dib-u-soo-nooleynta ee St. John's wort (H. perforatum) [10].
Nanoparticles-ka birta ah ee oksaydhka (Fe₃O₄) waa nooc ka mid ah nanoparticles-ka loo sameeyay ama loo horumarinayo dhaqanka unugyada. Fe₃O₄ wuxuu leeyahay sifooyin birlabeed oo muhiim ah, iswaafajin wanaagsan oo bayooloji ah, iyo awoodda lagu horumarinayo koritaanka dhirta iyo yareynta walbahaarka deegaanka, sidaa darteed waxay soo jiidatay fiiro gaar ah oo ku saabsan naqshadaha dhaqanka unugyada. Adeegsiga suurtagalka ah ee nanoparticles-kan waxaa ka mid noqon kara hagaajinta dhaqanka in vitro si loo dhiirrigeliyo kala qaybinta unugyada, loo hagaajiyo qaadashada nafaqada, loona dhaqaajiyo ensaymada antioxidant-ka [11].
In kasta oo nanoparticles-ku ay muujiyeen saameyn wanaagsan oo kor u qaadis ah oo ku saabsan koritaanka dhirta, haddana daraasadaha ku saabsan isticmaalka isku-darka ah ee nanoparticles-ka Fe₃O₄ iyo nidaamiyayaasha koritaanka dhirta ee la hagaajiyay ee *H. perforatum* ayaa weli yar. Si loo buuxiyo farqigan aqoonta, daraasaddani waxay qiimaysay saamaynta isku-darka ah ee morphogenesis-ka in vitro iyo wax-soo-saarka metabolite-ka labaad si loo bixiyo aragtiyo cusub oo lagu hagaajinayo astaamaha dhirta daawada. Sidaa darteed, daraasaddani waxay leedahay laba ujeedo: (1) hagaajinta isku-darka nidaamiyayaasha koritaanka dhirta si wax ku ool ah loogu dhiirrigeliyo sameynta callus, dib-u-soo-nooleynta toogashada, iyo xididaynta in vitro; iyo (2) qiimeynta saameynta nanoparticles-ka Fe₃O₄ ee xuduudaha koritaanka in vitro. Qorshayaasha mustaqbalka waxaa ka mid ah qiimeynta heerka badbaadada ee dhirta dib loo soo nooleeyay inta lagu jiro la qabsiga (in vitro). Waxaa la filayaa in natiijooyinka daraasaddani ay si weyn u horumarin doonaan hufnaanta faafinta micro-faafinta ee *H. perforatum*, taasoo gacan ka geysan doonta isticmaalka waara iyo codsiyada bayoolojiga ee geedkan daawada ee muhiimka ah.
Daraasaddan, waxaan ka helnay caleenta caleenta dhirta sanadlaha ah ee laga beero geedka St. John's wort (dhirta hooyada). Dhirtan waxaa loo isticmaalay in lagu wanaajiyo xaaladaha dhaqanka in vitro. Kahor inta aan la beerin, caleenta si fiican ayaa loogu raaci jiray biyo la sifeeyay dhowr daqiiqo. Dusha sare ee dhirta ayaa markaa lagu nadiifiyay biyo lagu dhex geliyay 70% ethanol muddo 30 ilbiriqsi ah, ka dibna waxaa lagu dhex gelin jiray xal 1.5% sodium hypochlorite (NaOCl) ah oo ka kooban dhowr dhibcood oo Tween 20 ah muddo 10 daqiiqo ah. Ugu dambeyntii, dhirta waxaa lagu dhaqay saddex jeer biyo nadiif ah oo la sifeeyay ka hor inta aan loo gudbin habka dhaqanka ee xiga.
Afartii toddobaad ee xigay, xuduudaha dib u soo noolaynta toogashada ayaa la cabbiray, oo ay ku jiraan heerka dib u soo noolaynta, tirada toogashada halkii geed, iyo dhererka toogashada. Markii caleemaha dib loo soo nooleeyay ay gaareen dherer ugu yaraan 2 cm ah, waxaa loo wareejiyay hab xidid oo ka kooban dhexdhexaad MS ah oo nus xoog leh, 0.5 mg/L indolebutyric acid (IBA), iyo 0.3% guar xanjo. Dhaqanka xididku wuxuu socday saddex toddobaad, inta lagu guda jiray waqtigaas ayaa la cabbiray heerka xididka, tirada xididka, iyo dhererka xididka. Daawayn kasta waxaa lagu celceliyay saddex jeer, iyadoo 10 ubax lagu beeray halkii geed, iyadoo la soo saaray qiyaastii 30 ubax daaweyn kasta.
Dhererka geedka waxaa lagu cabiray sentimitir (cm) iyadoo la adeegsanayo mastarad, laga bilaabo salka geedka ilaa caarada caleenka ugu dheer. Dhererka xididka waxaa lagu cabiray milimitir (mm) isla markiiba ka dib markii si taxaddar leh looga saaray geedo yaryar oo laga saaray bartamaha koraysa. Tirada burooyinkeeda halkii geed ayaa si toos ah loogu tiriyay geed kasta. Tirada dhibcaha madow ee caleenta, oo loo yaqaan qanjidhada, ayaa si muuqaal ah loo cabiray. Burooyinkan madow waxaa la rumeysan yahay inay yihiin qanjidhada ay ku jiraan hypericin, ama dhibco oksaydh, waxaana loo isticmaalaa tilmaame jireed oo muujinaya jawaabta geedka ee daaweynta. Ka dib markii laga saaray dhammaan unugyada koraya, miisaanka cusub ee geedaha waxaa lagu cabiray miisaan elektaroonik ah oo leh saxnaan milligrams (mg).
Habka loo xisaabiyo heerka sameynta callus waa sidan soo socota: ka dib marka la beero callus meel ay ku jiraan nidaamiyayaal korriin oo kala duwan (kinases, 2,4-D, iyo Fe3O4) muddo afar toddobaad ah, tirada callus-ka ee awood u leh sameynta callus ayaa la tiriyaa. Qaacidada lagu xisaabinayo heerka sameynta callus waa sidan soo socota:
Daawayn kasta waxaa lagu celceliyay saddex jeer, iyadoo ugu yaraan 10 jeer la baaray ku celcelin kasta.
Heerka dib-u-soo-noolaynta wuxuu muujinayaa saamiga unugyada callus-ka ee si guul leh u dhammaystiraya habka kala-soocidda burooyinka ka dib marxaladda sameynta callus-ka. Tilmaamahan wuxuu muujinayaa awoodda unugyada callus-ka ay u beddeli karaan unugyo kala duwan oo ay u kori karaan xubno cusub oo dhirta ah.
Heerka xididku waa saamiga tirada laamaha awood u leh inay xidid yeeshaan iyo tirada guud ee laamaha. Tilmaamahani wuxuu muujinayaa guusha marxaladda xididka, taas oo muhiim u ah faafinta yar yar iyo faafinta dhirta, maadaama xididka wanaagsani uu ka caawiyo geedo inay si fiican ugu noolaadaan xaaladaha koritaanka.
Isku-darka Hypericin waxaa lagu soo saaray 90% methanol. Konton mg oo ah walxo geed qalalan ayaa lagu daray 1 ml oo methanol ah waxaana lagu shubay 20 daqiiqo 30 kHz iyadoo lagu nadiifinayo ultrasonic (nooca A5120-3YJ) heerkulka qolka mugdiga ah. Ka dib sonication-ka, muunadda waxaa lagu centrifuge gareeyay 6000 rpm muddo 15 daqiiqo ah. Ka sarreeyaha ayaa la ururiyay, nuugista hypericin-na waxaa lagu cabiray 592 nm iyadoo la isticmaalayo Plus-3000 S spectrophotometer sida ku cad habka uu qeexay Conceiçao et al. [14].
Inta badan daawaynta lagu sameeyo nidaamiyayaasha koritaanka dhirta (PGRs) iyo nanoparticles-ka birta oksaydhka (Fe₃O₄-NPs) ma aysan kicin sameynta nodule madow oo ku yaal caleenta la soo saaray. Ma jirin nodules lagu arkay mid ka mid ah daawaynta lagu sameeyay 0.5 ama 1 mg/L 2,4-D, 0.5 ama 1 mg/L kinetin, ama 1, 2, ama 4 mg/L nanoparticles-ka birta oksaydhka. Dhowr isku-darka ayaa muujiyay koror yar oo ku yimid horumarka nodule (laakiin aan tirakoob ahaan muhiim ahayn) marka la eego heerarka sare ee kinetin iyo/ama nanoparticles-ka birta oksaydhka, sida isku-darka 2,4-D (0.5-2 mg/L) oo leh kinetin (1-1.5 mg/L) iyo nanoparticles-ka birta oksaydhka (2-4 mg/L). Natiijooyinkan waxaa lagu muujiyay Jaantuska 2. Nudules-ka madow waxay matalaan qanjidhada hodanka ku ah hypericin, labadaba si dabiici ah u dhaca oo faa'iido leh. Daraasaddan, nudules-ka madow waxay inta badan la xiriireen bunniyeynta unugyada, taasoo muujinaysa jawi wanaagsan oo loogu talagalay ururinta hypericin. Daaweynta nanoparticles-ka 2,4-D, kinetin, iyo Fe₃O₄ waxay kor u qaadday kobaca callus, waxay yareysay bunni-baxa, waxayna kordhisay tirada chlorophyll, taasoo soo jeedinaysa shaqada dheef-shiid kiimikaadka oo la hagaajiyay iyo yareynta suurtagalka ah ee dhaawaca oksaydhka [37]. Daraasaddani waxay qiimeysay saameynta kinetin iyadoo la isku darayo nanoparticles-ka 2,4-D iyo Fe₃O₄ ee koritaanka iyo horumarka callus-ka wort-ka ee St. John (Sawirka 3a–g). Daraasado hore ayaa muujiyay in nanoparticles-ka Fe₃O₄ ay leeyihiin hawlo antifungal iyo antimicrobial ah [38, 39], marka loo isticmaalo iyadoo lala kaashanayo nidaamiyayaasha koritaanka dhirta, waxay kicin karaan hababka difaaca dhirta waxayna yareyn karaan tusmooyinka walbahaarka unugyada [18]. Inkasta oo bayoolojiga metabolite-ka labaad uu yahay mid hidde ahaan la nidaamiyo, haddana wax-soo-saarkooda dhabta ah wuxuu aad ugu tiirsan yahay xaaladaha deegaanka. Isbeddellada dheef-shiid kiimikaadka iyo qaab-dhismeedka ayaa saameyn kara heerarka metabolite-ka labaad iyagoo nidaaminaya muujinta hiddo-sideyaasha dhirta gaarka ah iyo ka jawaab celinta arrimaha deegaanka. Intaa waxaa dheer, kiciyeyaasha waxay kicin karaan kicinta hiddo-sidayaasha cusub, kuwaas oo iyaguna kiciya dhaqdhaqaaqa enzymatic, ugu dambeyntiina kiciya waddooyin badan oo biosynthetic ah oo horseeda sameynta metabolites-ka labaad. Intaa waxaa dheer, daraasad kale ayaa muujisay in yaraynta hadhka ay kordhiso soo-gaadhista qorraxda, taasoo kor u qaadaysa heerkulka maalintii ee deegaanka dabiiciga ah ee *Hypericum perforatum*, kaas oo sidoo kale gacan ka geysta kororka wax-soo-saarka hypericin. Iyada oo lagu saleynayo xogtan, daraasaddani waxay baartay doorka nanoparticles-ka birta ah sida kiciyeyaasha suurtagalka ah ee dhaqanka unugyada. Natiijooyinka waxay muujiyeen in nanoparticles-yadani ay kicin karaan hiddo-sidayaasha ku lug leh biosynthesis-ka hesperidin iyada oo loo marayo kicinta enzymatic, taasoo horseedaysa kororka ururinta isku-dhafkan (Jaantuska 2). Sidaa darteed, marka la barbar dhigo dhirta ku koraysa xaaladaha dabiiciga ah, waxaa lagu doodi karaa in soo saarista isku-dhafka noocaas ah ee vivo sidoo kale la xoojin karo marka walbahaarka dhexdhexaadka ah lagu daro kicinta hiddo-sidayaasha ku lug leh biosynthesis-ka metabolite-ka labaad. Daaweynta isku-dhafka guud ahaan waxay saameyn togan ku leedahay heerka dib-u-cusboonaysiinta, laakiin xaaladaha qaarkood, saameyntani way daciiftaa. Waxaa xusid mudan, daawaynta 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L kinase, iyo xoogag kala duwan ayaa si madax-bannaan oo si weyn u kordhin kara heerka dib-u-cusboonaysiinta 50.85% marka la barbar dhigo kooxda xakamaynta (Jaantuska 4c). Natiijooyinkani waxay soo jeedinayaan in isku-darka gaarka ah ee nanohormones ay si isku mid ah u shaqayn karaan si kor loogu qaado koritaanka dhirta iyo wax-soo-saarka dheef-shiid kiimikaadka, taas oo muhiimad weyn u leh dhaqanka unugyada dhirta daawada. Palmer iyo Keller [50] waxay muujiyeen in daawaynta 2,4-D ay si madax-bannaan u kicin karto sameynta callus ee St. perforatum, halka ku darista kinase ay si weyn u xoojisay sameynta callus iyo dib-u-cusboonaysiinta. Saameyntani waxay sabab u ahayd horumarinta dheelitirka hoormoonka iyo kicinta qaybinta unugyada. Bal et al. [51] waxay ogaadeen in daaweynta Fe₃O₄-NP ay si madax-bannaan u horumarin karto shaqada ensaymada antioxidant-ka, taasoo kor u qaadaysa koritaanka xididka ee St. perforatum. Warbaahinta dhaqanka oo ka kooban nanoparticles-ka Fe₃O₄ oo leh xaddiga 0.5 mg/L, 1 mg/L, iyo 1.5 mg/L ayaa hagaajisay heerka dib u soo noolaynta dhirta flax [52]. Isticmaalka kinetin, 2,4-dichlorobenzothiazolinone, iyo nanoparticles-ka Fe₃O₄ ayaa si weyn u hagaajiyay heerarka sameynta callus iyo xididka, si kastaba ha ahaatee, waxaa loo baahan yahay in la tixgeliyo waxyeellooyinka ka iman kara isticmaalka hoormoonadan dib u soo noolaynta in vitro. Tusaale ahaan, isticmaalka muddada dheer ama xoogga sare ee 2,4-dichlorobenzothiazolinone ama kinetin waxay keeni kartaa kala duwanaansho somatic clonal ah, walbahaarka oksaydhka, qaab-dhismeedka callus-ka aan caadiga ahayn, ama vitrification. Sidaa darteed, heerka dib u soo noolaynta oo sareeya daruuri maaha inuu saadaaliyo xasilloonida hidde-sideyaasha. Dhammaan dhirta dib loo soo nooleeyay waa in lagu qiimeeyaa iyadoo la adeegsanayo calaamadaha molecular-ka (tusaale ahaan RAPD, ISSR, AFLP) ama falanqaynta cytogenetic-ga si loo go'aamiyo isku-dhafka iyo isku-ekaanshaha dhirta in vivo [53,54,55].
Daraasaddani waxay markii ugu horreysay muujisay in isticmaalka isku-darka ah ee nidaamiyayaasha koritaanka dhirta (2,4-D iyo kinetin) oo leh nanoparticles-ka Fe₃O₄ ay kor u qaadi karaan morphogenesis iyo ururinta metabolites-ka muhiimka ah ee noolaha firfircoon (oo ay ku jiraan hypericin iyo hyperoside) ee *Hypericum perforatum*. Nidaamka daaweynta ee la hagaajiyay (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) ma aha oo kaliya inuu kordhiyo sameynta callus, organogenesis, iyo wax-soo-saarka metabolite-ka labaad laakiin sidoo kale wuxuu muujiyay saameyn fudud oo kicinaysa, taasoo suurtogal ah inay hagaajiso dulqaadka walbahaarka ee dhirta iyo qiimaha daawada. Isku-darka nanotechnology iyo dhaqanka unugyada dhirta waxay bixiyaan goob waara oo hufan oo loogu talagalay wax-soo-saarka in vitro-ga ee isku-dhafka daawooyinka. Natiijooyinkani waxay u gogol xaarayaan codsiyada warshadaha iyo cilmi-baarista mustaqbalka ee hababka molecular-ka, hagaajinta qiyaasta iyo saxnaanta hidde-sidaha, taasoo isku xireysa cilmi-baarista aasaasiga ah ee dhirta daawada iyo bayotechnoolajiyadda wax ku oolka ah.
Waqtiga boostada: Diseembar-12-2025